今天，小編就與大家一起來了解一下菌落計數(shù)的具體步驟吧。
樣品的稀釋
固體和半固體樣品
稱取25 g置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2 min，制成1:10的樣品勻液。
液體樣品
以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。
上步完成后，用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。
移液過程使用的器具，都應(yīng)避免微生物污染。使用耐高壓移液槍，核查洗耳球無菌程度，避免移液槍觸及均質(zhì)袋或試管內(nèi)壁…… 樣品勻液完成后，可按相同操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時，吸取1 mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1 mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。 之后，及時將15 mL～20 mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。 培養(yǎng)和計數(shù) 樣品稀釋完成后，就要進(jìn)行培養(yǎng)和菌落計數(shù)了 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基 （約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按相同條件進(jìn)行培養(yǎng)。 培養(yǎng)完成后，就要進(jìn)行菌落計數(shù)了，計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units, CFU）表示。 選取菌落數(shù)在30 CFU～300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。 大片菌落 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。 鏈狀生長 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明 顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。 文章來源網(wǎng)絡(luò)，由中測校準(zhǔn)平臺總結(jié)發(fā)布，供業(yè)內(nèi)讀者參考交流，如有侵權(quán)，請聯(lián)系刪除
